Зміст

• Інструкції

Коли ви відвідуєте мікробіологію вищого рівня, ваш вчитель може вимагати від вас завершити проект, в якому ви повинні ідентифікувати невідомі бактерії через серію тестів. Для правильної ідентифікації цих бактерій необхідно мати все необхідне лабораторне обладнання та знати різні лабораторні процедури. Також вигідно мати блок-схему бактерій та їх лабораторні тести, щоб можна було ідентифікувати ваші бактерії.

Інструкції

Плити культури дозволяють виділити бактерії, щоб легко визначити їхні характеристики (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Підготуйте всі тести перед початком експерименту. Це включає в себе підготовку агарових пластин і трубок, а також підготовку необхідних показників, таких як реагент Ковака. Позначте всі пробірки та пластини належним чином, щоб вони не змішувалися, що призвело до помилкових результатів.

2. Сійте свої бактерії. Це дозволить визначити форму і колір вашої бактерії, такі як грампозитивні (фіолетові), грамнегативні (червоні або рожеві), кокосові горіхи (кругові), спірохети (спіралі) або стрижні. Щоб посіяти свою бактерію, вам знадобляться чиста леза, вода, кристалізація фіолетового, йоду, відбілювача, сафранину, абсорбуючого паперу, світлового мікроскопа і деяких паперових рушників. Після flambing петлі, використовуйте його, щоб помістити краплю води на лезо. Знову скрутити петлю, а потім помістити невелику кількість невідомих бактерій у краплю води. Проведіть леза над полум'ям кілька разів, щоб висушити і повністю приєднайте бактерії до леза. Накрийте його кристалічним фіолетом, залиште його на хвилину і потім обережно промийте. Потім покрийте лопаткою йод. Залишити на 30 секунд, а потім промити. Покладіть шматок абсорбуючого паперу на лопатку, щоб видалити надлишок води. Потім залийте відбілювач на лезо. Через п'ять секунд промийте, щоб видалити відбілювач. Нарешті, покрийте клинок сафраніном. Через 40 секунд промийте полотно і обережно висушіть паперовим рушником. Покладіть краплю олії на місце бактерій на слайді і подивіться під мікроскопом. Зверніть увагу на форму і колір видимих ​​бактерій.

   
   

3. Протестуйте оксидазу у ваших бактеріях. Для цього вам знадобляться паперовий фільтр, оксидазний реагент, E. coli, Pseudomonas і його невідомі бактерії. У цьому тесті Е. coli і Pseudomonas є контрольними. Ваша бактерія повинна бути менше 24 годин для цього тесту. Фламбуйте ручку і помістіть невелику кількість кожної бактерії на паперовий фільтр. За допомогою крапельниці помістіть одну краплю реагенту оксидази в кожну бактерію. Через 10 секунд зверніть увагу на колір кожної бактерії. Е. coli дасть позитивний результат і Pseudomonas дасть негативний результат. Бактерії, позитивні для ферменту цитохромоксидази, стануть пурпуровими, а негативні бактерії не змінять колір.

4. Випробування на сірководень (SIM). Проведіть ручку і використовуйте її, щоб забрати деякі бактерії з пластини. Інокулюйте трубку SIM-картки бактеріями та закрийте її. Залишити цю трубку в печі протягом 18-24 годин при 37 ° С. Визначте, чи є ваша бактерія рухливою (має джгутик). Якщо є ріст і похмурість далеко від того, де ви прищеплювали бактерії, це мобільний. Потім помістіть дві краплі реагенту Ковака в трубку. Якщо він має будь-яку зміну кольору до червоного або рожевого, його бактерія позитивна для цього тесту і містить триптофан, таким чином, виробник індолу. Якщо трубка стає чорною, її бактерії продукують сірководень.

   
   

5. Виконайте тест цитрату Simmon. Інокулюйте бактерії в двох пробірках з агаром Simmon. Залиште їх у духовці протягом 18-24 годин при 37 ° C. Агар спочатку зелений, але якщо бактерії використовують цитрат як джерело вуглецю, колір змінюється від зеленого до синього. Синій - позитивний результат. Якщо трубки залишаються зеленими, їх бактерії негативні для використання цитрату як єдиного джерела вуглецю.

6. Виконайте тест на метиловий червоний (MRVP). Для цього тесту потрібно дві пробірки, що містять розчин пептона, буферів і декстрози (або глюкози). Інокулюйте кожну пробірку з невідомими бактеріями і повертайте їх у плиту протягом 18-24 годин при 37 ° С. Коли готова, додайте три краплі метилового червоного до трубки. Це буде ваша MR трубка. Якщо трубка змінюється з жовтого на червоний, його бактерія позитивна і використовує змішаний шлях кислоти під час ферментації (виробляються молочна, оцтова і мурашина кислоти). У другу пробірку додають три краплі реагенту VP. Якщо трубка стає червоною, бактерія позитивно ставиться до утворення діацетилу, продукту ферментації. Якщо трубка стане коричневою, бактерія негативна.

7. Знайдіть свої бактерії, помітивши позитивні та негативні результати у блок-схемі.